रमन माइक्रोस्कोप: Difference between revisions

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[[File:Confocal Raman imaging microscope Witec alpha300 .jpg|alt=Photo of a confocal Raman imaging microscope|thumb|कन्फोकल रमन इमेजिंग माइक्रोस्कोप|191x191px]]
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[[File:InVia Raman microscope - March 2008.jpg|thumb|alt=Photo of a Raman microscope, with a sample enclosure|रमन माइक्रोस्कोप|188x188px]]रमन [[माइक्रोस्कोप]] एक लेजर आधारित माइक्रोस्कोप डिवाइस है जिसका इस्तेमाल [[रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी]] करने के लिए किया जाता है।<ref name="Anderson">''Microscopical techniques in the use of the molecular optics laser examiner Raman microprobe'', by M. E. Andersen, R. Z. Muggli, Analytical Chemistry, 1981, 53 (12), pp 1772–1777 [http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ac00235a013]</ref> MOLE (आणविक प्रकाशिकी लेजर परीक्षक) शब्द का उपयोग रमन-आधारित माइक्रोप्रोब को संदर्भित करने के लिए किया जाता है।<ref name=Anderson />उपयोग की जाने वाली तकनीक का नाम सी. वी. रमन के नाम पर रखा गया है, जिन्होंने तरल पदार्थों में बिखरने वाले गुणों की खोज की थी।<ref>{{Cite journal|last1=Krishnan|first1=K. S.|last2=Raman|first2=C. V.|date=1928|title=एक नए प्रकार का माध्यमिक विकिरण|journal=Nature|volume=121|issue=3048|pages=501–502|doi=10.1038/121501c0|bibcode=1928Natur.121..501R|s2cid=4128161|issn=1476-4687}}</ref>
[[File:InVia Raman microscope - March 2008.jpg|thumb|alt=Photo of a Raman microscope, with a sample enclosure|रमन माइक्रोस्कोप|188x188px]]रमन [[माइक्रोस्कोप]] एक लेजर आधारित माइक्रोस्कोप उपकरण है जिसका उपयोग [[रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी]] करने के लिए किया जाता है।<ref name="Anderson">''Microscopical techniques in the use of the molecular optics laser examiner Raman microprobe'', by M. E. Andersen, R. Z. Muggli, Analytical Chemistry, 1981, 53 (12), pp 1772–1777 [http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ac00235a013]</ref> मोल (आणविक प्रकाशिकी लेजर परीक्षक) शब्द का उपयोग रमन-आधारित माइक्रोप्रोब को संदर्भित करने के लिए किया जाता है।<ref name=Anderson /> उपयोग की जाने वाली विधि का नाम सी. वी. रमन के नाम पर रखा गया है जिन्होंने तरल पदार्थों में प्रकीर्णन वाले गुणों की खोज की थी।<ref>{{Cite journal|last1=Krishnan|first1=K. S.|last2=Raman|first2=C. V.|date=1928|title=एक नए प्रकार का माध्यमिक विकिरण|journal=Nature|volume=121|issue=3048|pages=501–502|doi=10.1038/121501c0|bibcode=1928Natur.121..501R|s2cid=4128161|issn=1476-4687}}</ref>
== कॉन्फ़िगरेशन ==
== कॉन्फ़िगरेशन ==
रमन माइक्रोस्कोप एक मानक [[ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप]] से शुरू होता है, और एक [[ उत्साहित राज्य ]] [[ लेज़र ]], ऑप्टिकल फिल्टर # लॉन्गपास, एक [[स्पेक्ट्रोमीटर]] या [[मोनोक्रोमेटर]], और एक ऑप्टिकल संवेदनशील [[डिटेक्टर]] जैसे चार्ज-युग्मित डिवाइस (सीसीडी), या [[फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब]], (पीएमटी) जोड़ता है। . परंपरागत रूप से रमन माइक्रोस्कोपी का उपयोग नमूने पर एक बिंदु के रमन स्पेक्ट्रम को मापने के लिए किया जाता था, हाल ही में इस तकनीक को त्रि-आयामी अंतरिक्ष नमूने पर देखने के पूरे क्षेत्र में प्रत्यक्ष [[रासायनिक इमेजिंग]] के लिए रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी को लागू करने के लिए विस्तारित किया गया है।
रमन माइक्रोस्कोप एक मानक [[ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप]] से प्रारंभ होता है और एक [[ उत्साहित राज्य | उत्साहित]] [[ लेज़र |लेज़र]] ऑप्टिकल फिल्टर या  लॉन्गपास, एक [[स्पेक्ट्रोमीटर]] या [[मोनोक्रोमेटर]], और एक ऑप्टिकल संवेदनशील [[डिटेक्टर|संसूचक]] जैसे चार्ज-युग्मित उपकरण (सीसीडी), या [[फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब]], (पीएमटी) जोड़ता है। परंपरागत रूप से रमन माइक्रोस्कोपी का उपयोग नमूने पर एक बिंदु के रमन स्पेक्ट्रम को मापने के लिए किया जाता था वर्तमान ही में इस विधि को त्रि-आयामी अंतरिक्ष नमूने पर देखने के पूरे क्षेत्र में प्रत्यक्ष [[रासायनिक इमेजिंग]] के लिए रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी को प्रयुक्त करने के लिए विस्तारित किया गया है।


== इमेजिंग मोड ==
== इमेजिंग मोड ==
प्रत्यक्ष इमेजिंग में, देखने के पूरे क्षेत्र की तरंगों की एक छोटी श्रृंखला (रमन शिफ्ट) पर बिखरने के लिए जांच की जाती है। उदाहरण के लिए, कोलेस्ट्रॉल के लिए एक तरंग संख्या विशेषता का उपयोग सेल कल्चर के भीतर कोलेस्ट्रॉल के वितरण को रिकॉर्ड करने के लिए किया जा सकता है।
प्रत्यक्ष इमेजिंग में देखने के पूरे क्षेत्र की तरंगों की एक छोटी श्रृंखला (रमन शिफ्ट) पर प्रकीर्णन के लिए जांच की जाती है। उदाहरण के लिए कोलेस्ट्रॉल के लिए एक तरंग संख्या विशेषता का उपयोग सेल संस्कृति के अंदर कोलेस्ट्रॉल के वितरण को रिकॉर्ड करने के लिए किया जा सकता है।
अन्य दृष्टिकोण [[हाइपरस्पेक्ट्रल इमेजिंग]] या रासायनिक इमेजिंग है, जिसमें पूरे दृश्य क्षेत्र से हजारों रमन स्पेक्ट्रा प्राप्त किए जाते हैं। तब डेटा का उपयोग विभिन्न घटकों के स्थान और मात्रा को दर्शाने वाली छवियां उत्पन्न करने के लिए किया जा सकता है। सेल कल्चर का उदाहरण लेते हुए, एक हाइपरस्पेक्ट्रल छवि कोलेस्ट्रॉल के वितरण को दिखा सकती है,<ref>{{Cite journal|last1=Matthäus|first1=Christian|last2=Krafft|first2=Christoph|last3=Dietzek|first3=Benjamin|last4=Brehm|first4=Bernhard R.|last5=Lorkowski|first5=Stefan|last6=Popp|first6=Jürgen|date=2012-10-16|title=स्थिर समस्थानिक लेबलिंग के साथ संयोजन में रमन माइक्रोस्कोपी द्वारा मैक्रोफेज में इंट्रासेल्युलर लिपिड चयापचय की गैर-आक्रामक इमेजिंग|journal=Analytical Chemistry|volume=84|issue=20|pages=8549–8556|doi=10.1021/ac3012347|pmid=22954250|issn=0003-2700}}</ref> साथ ही प्रोटीन, न्यूक्लिक एसिड और फैटी एसिड।<ref>{{Cite journal|last1=Baranska|first1=Malgorzata|last2=Chlopicki|first2=Stefan|last3=Fedorowicz|first3=Andrzej|last4=Kachamakova-Trojanowska|first4=Neli|last5=Kaczor|first5=Agnieszka|last6=Majzner|first6=Katarzyna|date=2012-12-10|title=3D confocal Raman imaging of endothelial cells and vascular wall: perspectives in analytical spectroscopy of biomedical research|journal=Analyst|volume=138|issue=2|pages=603–610|doi=10.1039/C2AN36222H|pmid=23172339|issn=1364-5528}}</ref><ref>{{Cite journal|last1=Rygula|first1=A.|last2=Majzner|first2=K.|last3=Marzec|first3=K. M.|last4=Kaczor|first4=A.|last5=Pilarczyk|first5=M.|last6=Baranska|first6=M.|date=2013-08-01|title=Raman spectroscopy of proteins: a review|journal=Journal of Raman Spectroscopy|volume=44|issue=8|pages=1061–1076|doi=10.1002/jrs.4335|bibcode=2013JRSp...44.1061R|issn=1097-4555}}</ref><ref>{{Cite journal|last1=Czamara|first1=K.|last2=Majzner|first2=K.|last3=Pacia|first3=M. Z.|last4=Kochan|first4=K.|last5=Kaczor|first5=A.|last6=Baranska|first6=M.|date=2015-01-01|title=Raman spectroscopy of lipids: a review|journal=Journal of Raman Spectroscopy|volume=46|issue=1|pages=4–20|doi=10.1002/jrs.4607|bibcode=2015JRSp...46....4C|issn=1097-4555}}</ref> परिष्कृत सिग्नल- और इमेज-प्रोसेसिंग तकनीकों का उपयोग पानी, संस्कृति मीडिया, बफ़र्स और अन्य हस्तक्षेप की उपस्थिति को अनदेखा करने के लिए किया जा सकता है।
 
अन्य दृष्टिकोण [[हाइपरस्पेक्ट्रल इमेजिंग]] या रासायनिक इमेजिंग है जिसमें पूरे दृश्य क्षेत्र से हजारों रमन स्पेक्ट्रा प्राप्त किए जाते हैं। तब डेटा का उपयोग विभिन्न घटकों के स्थान और मात्रा को दर्शाने वाली छवियां उत्पन्न करने के लिए किया जा सकता है। सेल संस्कृति का उदाहरण लेते हुए, एक हाइपरस्पेक्ट्रल छवि कोलेस्ट्रॉल के वितरण को दिखा सकती है,<ref>{{Cite journal|last1=Matthäus|first1=Christian|last2=Krafft|first2=Christoph|last3=Dietzek|first3=Benjamin|last4=Brehm|first4=Bernhard R.|last5=Lorkowski|first5=Stefan|last6=Popp|first6=Jürgen|date=2012-10-16|title=स्थिर समस्थानिक लेबलिंग के साथ संयोजन में रमन माइक्रोस्कोपी द्वारा मैक्रोफेज में इंट्रासेल्युलर लिपिड चयापचय की गैर-आक्रामक इमेजिंग|journal=Analytical Chemistry|volume=84|issue=20|pages=8549–8556|doi=10.1021/ac3012347|pmid=22954250|issn=0003-2700}}</ref> साथ ही प्रोटीन, न्यूक्लिक अम्ल  और फैटी अम्ल ।<ref>{{Cite journal|last1=Baranska|first1=Malgorzata|last2=Chlopicki|first2=Stefan|last3=Fedorowicz|first3=Andrzej|last4=Kachamakova-Trojanowska|first4=Neli|last5=Kaczor|first5=Agnieszka|last6=Majzner|first6=Katarzyna|date=2012-12-10|title=3D confocal Raman imaging of endothelial cells and vascular wall: perspectives in analytical spectroscopy of biomedical research|journal=Analyst|volume=138|issue=2|pages=603–610|doi=10.1039/C2AN36222H|pmid=23172339|issn=1364-5528}}</ref><ref>{{Cite journal|last1=Rygula|first1=A.|last2=Majzner|first2=K.|last3=Marzec|first3=K. M.|last4=Kaczor|first4=A.|last5=Pilarczyk|first5=M.|last6=Baranska|first6=M.|date=2013-08-01|title=Raman spectroscopy of proteins: a review|journal=Journal of Raman Spectroscopy|volume=44|issue=8|pages=1061–1076|doi=10.1002/jrs.4335|bibcode=2013JRSp...44.1061R|issn=1097-4555}}</ref><ref>{{Cite journal|last1=Czamara|first1=K.|last2=Majzner|first2=K.|last3=Pacia|first3=M. Z.|last4=Kochan|first4=K.|last5=Kaczor|first5=A.|last6=Baranska|first6=M.|date=2015-01-01|title=Raman spectroscopy of lipids: a review|journal=Journal of Raman Spectroscopy|volume=46|issue=1|pages=4–20|doi=10.1002/jrs.4607|bibcode=2015JRSp...46....4C|issn=1097-4555}}</ref> परिष्कृत सिग्नल- और इमेज-प्रोसेसिंग विधियों का उपयोग पानी संस्कृति मीडिया, बफ़र्स और अन्य हस्तक्षेप की उपस्थिति को अनदेखा करने के लिए किया जा सकता है।


== संकल्प ==
== संकल्प ==
रमन माइक्रोस्कोपी, और विशेष रूप से [[ संनाभि माइक्रोस्कोपी ]], उप-माइक्रोमीटर पार्श्व स्थानिक संकल्प तक पहुंच सकते हैं।<ref>{{Cite book|date=2018|editor-last=Toporski|editor-first=Jan|editor2-last=Dieing|editor2-first=Thomas|editor3-last=Hollricher|editor3-first=Olaf|title=कन्फोकल रमन माइक्रोस्कोपी|series=Springer Series in Surface Sciences|volume=66|doi=10.1007/978-3-319-75380-5|issn=0931-5195|isbn=978-3-319-75378-2|url=http://cds.cern.ch/record/1339422}}</ref> क्योंकि रमन सूक्ष्मदर्शी एक [[विवर्तन-सीमित प्रणाली]] है, इसका स्थानिक विभेदन प्रकाश की तरंग दैर्ध्य और ध्यान केंद्रित करने वाले तत्व के [[संख्यात्मक छिद्र]] पर निर्भर करता है। कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोपी में, कॉन्फोकल अपर्चर का व्यास एक अतिरिक्त कारक है। अंगूठे के एक नियम के रूप में, पार्श्व स्थानिक संकल्प वायु उद्देश्य लेंस का उपयोग करते समय लगभग लेजर तरंगदैर्ध्य तक पहुंच सकता है, जबकि तेल या पानी के विसर्जन के उद्देश्य लगभग आधे लेजर तरंग दैर्ध्य के पार्श्व संकल्प प्रदान कर सकते हैं। इसका मतलब यह है कि जब दृश्यमान से निकट-अवरक्त रेंज में संचालित किया जाता है, तो रमन माइक्रोस्कोप लगभग पार्श्व संकल्प प्राप्त कर सकता है। 1 माइक्रोमीटर से 250 एनएम तक, जबकि गहराई रिज़ॉल्यूशन (यदि नमूना की ऑप्टिकल पैठ गहराई तक सीमित नहीं है) 1-6 माइक्रोमीटर से लेकर सबसे छोटे कॉन्फोकल पिनहोल एपर्चर के साथ दसियों माइक्रोमीटर तक हो सकता है, जब बिना कॉन्फोकल पिनहोल के संचालित किया जाता है।<ref name="ApplSpectrosc">{{cite journal |author=Neil J. Everall |title=Confocal Raman Microscopy: Performance, Pitfalls, and Best Practice |journal=Applied Spectroscopy |volume=63  |issue=9 |pages=245A–262A |date=2009 |doi=10.1366/000370209789379196 |pmid=19796478 |bibcode=2009ApSpe..63..245E |issn=1943-3530  |doi-access=free }}</ref><ref>[https://media.nature.com/original/nature-assets/srep/2015/151217/srep18410/extref/srep18410-s1.pdf Supporting Information] of {{cite journal |author=T. Schmid |author2=N. Schäfer |author3=S. Levcenko |author4=T. Rissom |author5=D. Abou-Ras |title=Orientation-distribution mapping of polycrystalline materials by Raman microspectroscopy |journal=Scientific Reports |volume=5  |pages=18410 |date=2015 |doi=10.1038/srep18410 |pmid=26673970 |issn=2045-2322  |pmc=4682063 |bibcode=2015NatSR...518410S }}</ref><ref>{{cite journal |author=Lothar Opilik |author2=Thomas Schmid |author3=Renato Zenobi |title=Modern Raman Imaging: Vibrational Spectroscopy on the Micrometer and Nanometer Scales |journal=Annual Review of Analytical Chemistry |volume=6  |pages=379–398 |date=2013 |doi=10.1146/annurev-anchem-062012-092646 |pmid=23772660 |bibcode=2013ARAC....6..379O |issn=1936-1335  }}</ref> चूंकि माइक्रोस्कोप के ऑब्जेक्टिव लेंस लेजर बीम को माइक्रोमीटर रेंज तक फोकस करते हैं, परिणामी फोटॉन फ्लक्स पारंपरिक रमन सेटअपों की तुलना में बहुत अधिक है। इसमें हस्तक्षेप करने वाले प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने वाले अणुओं की बढ़ी हुई [[photobleaching]] का अतिरिक्त प्रभाव है। हालांकि, उच्च फोटॉन प्रवाह भी नमूना गिरावट का कारण बन सकता है, और इस प्रकार, प्रत्येक प्रकार के नमूने के लिए, लेजर तरंग दैर्ध्य और लेजर शक्ति को सावधानी से चुनना होगा।
रमन माइक्रोस्कोपी, और विशेष रूप से [[ संनाभि माइक्रोस्कोपी ]], उप-माइक्रोमीटर पार्श्व स्थानिक संकल्प तक पहुंच सकते हैं।<ref>{{Cite book|date=2018|editor-last=Toporski|editor-first=Jan|editor2-last=Dieing|editor2-first=Thomas|editor3-last=Hollricher|editor3-first=Olaf|title=कन्फोकल रमन माइक्रोस्कोपी|series=Springer Series in Surface Sciences|volume=66|doi=10.1007/978-3-319-75380-5|issn=0931-5195|isbn=978-3-319-75378-2|url=http://cds.cern.ch/record/1339422}}</ref> क्योंकि रमन सूक्ष्मदर्शी एक [[विवर्तन-सीमित प्रणाली]] है, इसका स्थानिक विभेदन प्रकाश की तरंग दैर्ध्य और ध्यान केंद्रित करने वाले तत्व के [[संख्यात्मक छिद्र]] पर निर्भर करता है। कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोपी में, कॉन्फोकल अपर्चर का व्यास एक अतिरिक्त कारक है। वलय के एक नियम के रूप में, पार्श्व स्थानिक संकल्प वायु उद्देश्य लेंस का उपयोग करते समय लगभग लेजर तरंगदैर्ध्य तक पहुंच सकता है, जबकि तेल या पानी के विसर्जन के उद्देश्य लगभग आधे लेजर तरंग दैर्ध्य के पार्श्व संकल्प प्रदान कर सकते हैं। इसका अर्थ यह है कि जब दृश्यमान से निकट-अवरक्त सीमा में संचालित किया जाता है तो रमन माइक्रोस्कोप लगभग पार्श्व संकल्प प्राप्त कर सकता है। 1 माइक्रोमीटर से 250 एनएम तक, जबकि गहराई रिज़ॉल्यूशन (यदि नमूना की ऑप्टिकल पैठ गहराई तक सीमित नहीं है) 1-6 माइक्रोमीटर से लेकर सबसे छोटे कॉन्फोकल पिनहोल एपर्चर के साथ दस माइक्रोमीटर तक हो सकता है जब बिना कॉन्फोकल पिनहोल के संचालित किया जाता है।<ref name="ApplSpectrosc">{{cite journal |author=Neil J. Everall |title=Confocal Raman Microscopy: Performance, Pitfalls, and Best Practice |journal=Applied Spectroscopy |volume=63  |issue=9 |pages=245A–262A |date=2009 |doi=10.1366/000370209789379196 |pmid=19796478 |bibcode=2009ApSpe..63..245E |issn=1943-3530  |doi-access=free }}</ref><ref>[https://media.nature.com/original/nature-assets/srep/2015/151217/srep18410/extref/srep18410-s1.pdf Supporting Information] of {{cite journal |author=T. Schmid |author2=N. Schäfer |author3=S. Levcenko |author4=T. Rissom |author5=D. Abou-Ras |title=Orientation-distribution mapping of polycrystalline materials by Raman microspectroscopy |journal=Scientific Reports |volume=5  |pages=18410 |date=2015 |doi=10.1038/srep18410 |pmid=26673970 |issn=2045-2322  |pmc=4682063 |bibcode=2015NatSR...518410S }}</ref><ref>{{cite journal |author=Lothar Opilik |author2=Thomas Schmid |author3=Renato Zenobi |title=Modern Raman Imaging: Vibrational Spectroscopy on the Micrometer and Nanometer Scales |journal=Annual Review of Analytical Chemistry |volume=6  |pages=379–398 |date=2013 |doi=10.1146/annurev-anchem-062012-092646 |pmid=23772660 |bibcode=2013ARAC....6..379O |issn=1936-1335  }}</ref> चूंकि माइक्रोस्कोप के ऑब्जेक्टिव लेंस लेजर बीम को माइक्रोमीटर सीमा तक फोकस करते हैं, परिणामी फोटॉन फ्लक्स पारंपरिक रमन सेटअपों की तुलना में बहुत अधिक है। इसमें हस्तक्षेप करने वाले प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने वाले अणुओं की बढ़ी हुई [[photobleaching|फोटोब्लीचिंग]] का अतिरिक्त प्रभाव है। चूँकि उच्च फोटॉन प्रवाह भी नमूना गिरावट का कारण बन सकता है और इस प्रकार, प्रत्येक प्रकार के नमूने के लिए लेजर तरंग दैर्ध्य और लेजर शक्ति को सावधानी से चुनना होगा।


== रमन इमेजिंग ==
== रमन इमेजिंग ==
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एक अन्य उपकरण जो अधिक लोकप्रिय हो रहा है वह है वैश्विक रमन इमेजिंग। इस तकनीक का उपयोग बड़े पैमाने के उपकरणों के लक्षण वर्णन, विभिन्न यौगिकों के मानचित्रण और गतिकी अध्ययन के लिए किया जा रहा है। यह पहले से ही [[ग्राफीन]] परतों के लक्षण वर्णन के लिए इस्तेमाल किया जा चुका है,<ref>{{Cite journal|last1=Shen|first1=Zexiang|last2=Yu|first2=Ting|last3=Wang|first3=Yingying|last4=Ni|first4=Zhenhua|date=2008-10-01|title=रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी और ग्राफीन की इमेजिंग|journal=Nano Research|volume=1|issue=4|pages=273–291|doi=10.1007/s12274-008-8036-1|issn=1998-0000|arxiv=0810.2836|s2cid=33529560}}</ref> [[जे-समुच्चय]] | [[कार्बन नैनोट्यूब]] के अंदर जे-एग्रीगेटेड डाई और कई अन्य 2डी सामग्री जैसे मोलिब्डेनम डाइसल्फ़ाइड| एमओएस<sub>2</sub><ref>{{Cite journal|last1=Li|first1=Hai|last2=Lu|first2=Gang|last3=Yin|first3=Zongyou|last4=He|first4=Qiyuan|last5=Li|first5=Hong|last6=Zhang|first6=Qing|last7=Zhang|first7=Hua|date=2012-03-12|title=Optical Identification of Single- and Few-Layer MoS2 Sheets|journal=Small|volume=8|issue=5|pages=682–686|doi=10.1002/smll.201101958|pmid=22223545|issn=1613-6829}}</ref> and Tungsten diselenide|WSe<sub>2</sub>. चूँकि उत्तेजना पुँज पूरे क्षेत्र में फैला हुआ है, इसलिए उन मापों को नमूने को नुकसान पहुँचाए बिना किया जा सकता है।
रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग करके, नमूनों के सूक्ष्म क्षेत्रों के इन विवो समय और अंतरिक्ष-समाधान रमन स्पेक्ट्रा को मापा जा सकता है। नतीजतन, पानी, मीडिया और बफ़र्स की प्रतिदीप्ति को हटाया जा सकता है। नतीजतन, यह प्रोटीन, कोशिकाओं और ऑर्गेनेल की जांच करने के लिए उपयुक्त है।


जैविक और चिकित्सकीय नमूनों के लिए रमन माइक्रोस्कोपी आम तौर पर नियर-इन्फ्रारेड (NIR) लेज़रों (785 एनएम [[डायोड-पंप सॉलिड-स्टेट लेजर]] और 1064 एनएम एनडी:याग लेज़र|एनडी:याग विशेष रूप से आम हैं) का उपयोग करता है। यह उच्च ऊर्जा तरंग दैर्ध्य को लागू करके नमूने को नुकसान पहुंचाने के जोखिम को कम करता है। हालाँकि, NIR रमन प्रकीर्णन की तीव्रता कम है (ω<sup>4</sup> रमन प्रकीर्णन तीव्रता की निर्भरता), और अधिकांश डिटेक्टरों को बहुत लंबे संग्रह समय की आवश्यकता होती है। हाल ही में, अधिक संवेदनशील डिटेक्टर उपलब्ध हो गए हैं, जिससे तकनीक बेहतर अनुकूल हो गई है
एक अन्य उपकरण जो अधिक लोकप्रिय हो रहा है वह है वैश्विक रमन इमेजिंग इस विधि का उपयोग बड़े मापदंड के उपकरणों के लक्षण वर्णन विभिन्न यौगिकों के मानचित्रण और गतिकी अध्ययन के लिए किया जा रहा है। यह पहले से ही [[ग्राफीन]] परतों के लक्षण वर्णन के लिए उपयोग किया जा चुका है<ref>{{Cite journal|last1=Shen|first1=Zexiang|last2=Yu|first2=Ting|last3=Wang|first3=Yingying|last4=Ni|first4=Zhenhua|date=2008-10-01|title=रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी और ग्राफीन की इमेजिंग|journal=Nano Research|volume=1|issue=4|pages=273–291|doi=10.1007/s12274-008-8036-1|issn=1998-0000|arxiv=0810.2836|s2cid=33529560}}</ref> [[जे-समुच्चय]] [[कार्बन नैनोट्यूब]] के अंदर जे-एग्रीगेटेड डाई और कई अन्य 2डी सामग्री जैसे मोलिब्डेनम डाइसल्फ़ाइड| MoS<sub>2</sub><ref>{{Cite journal|last1=Li|first1=Hai|last2=Lu|first2=Gang|last3=Yin|first3=Zongyou|last4=He|first4=Qiyuan|last5=Li|first5=Hong|last6=Zhang|first6=Qing|last7=Zhang|first7=Hua|date=2012-03-12|title=Optical Identification of Single- and Few-Layer MoS2 Sheets|journal=Small|volume=8|issue=5|pages=682–686|doi=10.1002/smll.201101958|pmid=22223545|issn=1613-6829}}</ref> और टंगस्टन डिसेलेनाइड  WSe<sub>2</sub> चूँकि उत्तेजना पुँज पूरे क्षेत्र में फैला हुआ है इसलिए उन मापों को नमूने को हानि पहुँचाए बिना किया जा सकता है।
सामान्य उपयोग के लिए। अकार्बनिक नमूनों की रमन माइक्रोस्कोपी, जैसे कि चट्टानें, चीनी मिट्टी की चीज़ें और पॉलिमर, <रेफरी नाम = श्मिट 133-143>{{Cite journal|last1=Schmidt|first1=U.|last2=Hild|first2=S.|last3=Ibach|first3=W.|last4=Hollricher|first4=O.|date=2005-12-01|title=कन्फोकल रमन एएफएम के साथ नैनोमीटर स्केल पर थिन पॉलीमर फिल्म्स की विशेषता|journal=Macromolecular Symposia|volume=230|issue=1|pages=133–143|doi=10.1002/masy.200551152|issn=1521-3900}}</ref> उत्तेजन तरंगदैर्घ्य की व्यापक श्रेणी का उपयोग कर सकता है।
 
रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग करके नमूनों के सूक्ष्म क्षेत्रों के इन विवो समय और अंतरिक्ष-समाधान रमन स्पेक्ट्रा को मापा जा सकता है। परिणाम स्वरुप  पानी, मीडिया और बफ़र्स की प्रतिदीप्ति को हटाया जा सकता है। परिणाम स्वरुप यह प्रोटीन, कोशिकाओं और ऑर्गेनेल की जांच करने के लिए उपयुक्त है।
 
जैविक और चिकित्सकीय नमूनों के लिए रमन माइक्रोस्कोपी सामान्यतः नियर-इन्फ्रारेड (एनआईआर) लेज़रों (785 एनएम [[डायोड-पंप सॉलिड-स्टेट लेजर]] और 1064 एनएम एनडी:याग लेज़र|एनडी:याग विशेष रूप से समान हैं) का उपयोग करता है। यह उच्च ऊर्जा तरंग दैर्ध्य को प्रयुक्त करके नमूने को हानि पहुंचाने के कठिन परिस्थितिको कम करता है। चूँकि एनआईआर रमन प्रकीर्णन की तीव्रता कम है (ω<sup>4</sup> रमन प्रकीर्णन तीव्रता की निर्भरता) और अधिकांश सूचकों को बहुत लंबे संग्रह समय की आवश्यकता होती है। वर्तमान ही में अधिक संवेदनशील संसूचक  उपलब्ध हो गए हैं जिससे विधि उत्तम अनुकूल हो गई है
 
सामान्य उपयोग के लिए अकार्बनिक नमूनों की रमन माइक्रोस्कोपी जैसे कि चट्टानें चीनी मिट्टी की चीज़ें और पॉलिमर''', <रेफरी नाम = श्मिट 133-143>{{Cite journal|last1=Schmidt|first1=U.|last2=Hild|first2=S.|last3=Ibach|first3=W.|last4=Hollricher|first4=O.|date=2005-12-01|title=कन्फोकल रमन एएफएम के साथ नैनोमीटर स्केल पर थिन पॉलीमर फिल्म्स की विशेषता|journal=Macromolecular Symposia|volume=230|issue=1|pages=133–143|doi=10.1002/masy.200551152|issn=1521-3900}}<nowiki></ref></nowiki>''' उत्तेजन तरंगदैर्घ्य की व्यापक श्रेणी का उपयोग कर सकता है।
 
एक संबंधित विधि टिप-एन्हांस्ड रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी, एकल अणुओं और डीएनए की उच्च-रिज़ॉल्यूशन हाइपरस्पेक्ट्रल छवियों का उत्पादन कर सकती है।


एक संबंधित तकनीक, [[टिप-एन्हांस्ड रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी]], एकल अणुओं की उच्च-रिज़ॉल्यूशन हाइपरस्पेक्ट्रल छवियां उत्पन्न कर सकती है रेफरी>{{Cite journal|last1=Apkarian|first1=V. Ara|last2=Nicholas Tallarida|last3=Crampton|first3=Kevin T.|last4=Lee|first4=Joonhee|date=April 2019|title=परमाणु रूप से सीमित प्रकाश के साथ एकल अणु के कंपन सामान्य मोड की कल्पना करना|journal=Nature|volume=568|issue=7750|pages=78–82|doi=10.1038/s41586-019-1059-9|pmid=30944493|bibcode=2019Natur.568...78L|s2cid=92998248|issn=1476-4687}}</ref> और डीएनए। रेफरी>{{Cite journal|last1=He|first1=Zhe|last2=Han|first2=Zehua|last3=Kizer|first3=Megan|last4=Linhardt|first4=Robert J.|last5=Wang|first5=Xing|last6=Sinyukov|first6=Alexander M.|last7=Wang|first7=Jizhou|last8=Deckert|first8=Volker|last9=Sokolov|first9=Alexei V.|date=2019-01-16|title=टिप-एन्हांस्ड रमन इमेजिंग ऑफ़ सिंगल-स्ट्रेंडेड डीएनए विद सिंगल बेस रेजोल्यूशन|journal=Journal of the American Chemical Society|volume=141|issue=2|pages=753–757|doi=10.1021/jacs.8b11506|pmid=30586988|s2cid=58552541 |issn=0002-7863}}</ref>
एक संबंधित तकनीक, [[टिप-एन्हांस्ड रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी]], एकल अणुओं की उच्च-रिज़ॉल्यूशन हाइपरस्पेक्ट्रल छवियां उत्पन्न कर सकती है रेफरी>{{Cite journal|last1=Apkarian|first1=V. Ara|last2=Nicholas Tallarida|last3=Crampton|first3=Kevin T.|last4=Lee|first4=Joonhee|date=April 2019|title=परमाणु रूप से सीमित प्रकाश के साथ एकल अणु के कंपन सामान्य मोड की कल्पना करना|journal=Nature|volume=568|issue=7750|pages=78–82|doi=10.1038/s41586-019-1059-9|pmid=30944493|bibcode=2019Natur.568...78L|s2cid=92998248|issn=1476-4687}}</ref> और डीएनए। रेफरी>{{Cite journal|last1=He|first1=Zhe|last2=Han|first2=Zehua|last3=Kizer|first3=Megan|last4=Linhardt|first4=Robert J.|last5=Wang|first5=Xing|last6=Sinyukov|first6=Alexander M.|last7=Wang|first7=Jizhou|last8=Deckert|first8=Volker|last9=Sokolov|first9=Alexei V.|date=2019-01-16|title=टिप-एन्हांस्ड रमन इमेजिंग ऑफ़ सिंगल-स्ट्रेंडेड डीएनए विद सिंगल बेस रेजोल्यूशन|journal=Journal of the American Chemical Society|volume=141|issue=2|pages=753–757|doi=10.1021/jacs.8b11506|pmid=30586988|s2cid=58552541 |issn=0002-7863}}</ref>
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कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोपी को कई अन्य माइक्रोस्कोपी तकनीकों के साथ जोड़ा जा सकता है। विभिन्न तरीकों का उपयोग करके और डेटा को सहसंबद्ध करके, उपयोगकर्ता नमूने की अधिक व्यापक समझ प्राप्त करता है। सहसंबंधी माइक्रोस्कोपी तकनीकों के सामान्य उदाहरण हैं [[परमाणु बल माइक्रोस्कोपी]] | रमन-एएफएम,<ref>{{Cite journal|date=2014-11-01|title=A novel approach to investigate vascular wall in 3D: Combined Raman spectroscopy and atomic force microscopy for aorta en face imaging|journal=Vibrational Spectroscopy|volume=75|pages=39–44|doi=10.1016/j.vibspec.2014.09.004|issn=0924-2031|last1=Pilarczyk|first1=Marta|last2=Rygula|first2=Anna|last3=Kaczor|first3=Agnieszka|last4=Mateuszuk|first4=Lukasz|last5=Maślak|first5=Edyta|last6=Chlopicki|first6=Stefan|last7=Baranska|first7=Malgorzata}}</ref><रेफरी नाम = श्मिट 133-143 /> रमन-[[ निकट-क्षेत्र स्कैनिंग ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप | निकट-क्षेत्र स्कैनिंग ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप]] ,<ref>{{Cite journal|last1=Stark|first1=Robert W.|last2=Hillenbrand|first2=Rainer|last3=Ziegler|first3=Alexander|last4=Bauer|first4=Michael|last5=Huber|first5=Andreas J.|last6=Gigler|first6=Alexander M.|date=2009-12-07|title=IR s-SNOM और कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोपी द्वारा SiC में नैनोइंडेंट्स के आसपास नैनोस्केल अवशिष्ट तनाव-क्षेत्र मानचित्रण|journal=Optics Express|volume=17|issue=25|pages=22351–22357|doi=10.1364/OE.17.022351|pmid=20052158|bibcode=2009OExpr..1722351G|issn=1094-4087|doi-access=free}}</ref> और रमन-[[स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप]]।<ref>{{Cite journal|date=2016-03-01|title=An overview of emerging hyphenated SEM-EDX and Raman spectroscopy systems: Applications in life, environmental and materials sciences|journal=TrAC Trends in Analytical Chemistry|volume=77|pages=156–166|doi=10.1016/j.trac.2015.12.001|issn=0165-9936|last1=Cardell|first1=Carolina|last2=Guerra|first2=Isabel}}</ref>
कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोपी को कई अन्य माइक्रोस्कोपी विधियों के साथ जोड़ा जा सकता है। विभिन्न तरीकों का उपयोग करके और डेटा को सहसंबद्ध करके, उपयोगकर्ता नमूने की अधिक व्यापक समझ प्राप्त करता है। सहसंबंधी माइक्रोस्कोपी विधियों के सामान्य उदाहरण हैं [[परमाणु बल माइक्रोस्कोपी]] | रमन-एएफएम,<ref>{{Cite journal|date=2014-11-01|title=A novel approach to investigate vascular wall in 3D: Combined Raman spectroscopy and atomic force microscopy for aorta en face imaging|journal=Vibrational Spectroscopy|volume=75|pages=39–44|doi=10.1016/j.vibspec.2014.09.004|issn=0924-2031|last1=Pilarczyk|first1=Marta|last2=Rygula|first2=Anna|last3=Kaczor|first3=Agnieszka|last4=Mateuszuk|first4=Lukasz|last5=Maślak|first5=Edyta|last6=Chlopicki|first6=Stefan|last7=Baranska|first7=Malgorzata}}</ref><रेफरी नाम = श्मिट 133-143 /> रमन-[[ निकट-क्षेत्र स्कैनिंग ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप | निकट-क्षेत्र स्कैनिंग ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप]] ,<ref>{{Cite journal|last1=Stark|first1=Robert W.|last2=Hillenbrand|first2=Rainer|last3=Ziegler|first3=Alexander|last4=Bauer|first4=Michael|last5=Huber|first5=Andreas J.|last6=Gigler|first6=Alexander M.|date=2009-12-07|title=IR s-SNOM और कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोपी द्वारा SiC में नैनोइंडेंट्स के आसपास नैनोस्केल अवशिष्ट तनाव-क्षेत्र मानचित्रण|journal=Optics Express|volume=17|issue=25|pages=22351–22357|doi=10.1364/OE.17.022351|pmid=20052158|bibcode=2009OExpr..1722351G|issn=1094-4087|doi-access=free}}</ref> और रमन-[[स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप]]।<ref>{{Cite journal|date=2016-03-01|title=An overview of emerging hyphenated SEM-EDX and Raman spectroscopy systems: Applications in life, environmental and materials sciences|journal=TrAC Trends in Analytical Chemistry|volume=77|pages=156–166|doi=10.1016/j.trac.2015.12.001|issn=0165-9936|last1=Cardell|first1=Carolina|last2=Guerra|first2=Isabel}}</ref>
सहसंबंधी एसईएम-रमन इमेजिंग एक एसईएम कक्ष में एक कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोप का एकीकरण है जो एसई, बीएसई, [[ऊर्जा फैलाने वाला एक्स-रे स्पेक्ट्रोस्कोपी]], [[इलेक्ट्रॉन बैकस्कैटर विवर्तन]], [[इलेक्ट्रॉन बीम-प्रेरित वर्तमान]], [[कैथोडोल्यूमिनेसेंस]] जैसी कई तकनीकों की सहसंबंधी इमेजिंग की अनुमति देता है। , परमाणु बल माइक्रोस्कोपी।<ref>{{Cite journal|doi=10.1116/1.4897502|title = Integrating focused ion beam–scanning electron microscope with confocal Raman microscope into a single instrument|journal = Journal of Vacuum Science & Technology B, Nanotechnology and Microelectronics: Materials, Processing, Measurement, and Phenomena|volume = 32|issue = 6|pages = 06FC03|year = 2014|last1 = Jiruše|first1 = Jaroslav|last2 = Haničinec|first2 = Martin|last3 = Havelka|first3 = Miloslav|last4 = Hollricher|first4 = Olaf|last5 = Ibach|first5 = Wolfram|last6 = Spizig|first6 = Peter}}</ref> नमूना इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के निर्वात कक्ष में रखा गया है। दोनों विश्लेषण विधियों को फिर उसी नमूना स्थान पर स्वचालित रूप से निष्पादित किया जाता है। इसके बाद प्राप्त SEM और रमन छवियों को आरोपित किया जा सकता है।<ref>{{Cite journal|last1=Hollricher|first1=Olaf|last2=Schmidt|first2=Ute|last3=Breuninger|first3=Sonja|date=November 2014|title=RISE Microscopy: Correlative Raman-SEM Imaging|journal=Microscopy Today|volume=22|issue=6|pages=36–39|doi=10.1017/s1551929514001175|s2cid=138153106|issn=1551-9295}}</ref><ref>{{Cite journal|last1=Wille|first1=G.|last2=Lerouge|first2=C.|last3=Schmidt|first3=U.|date=2018-06-01|title=कैथोडोल्युमिनिसेंस, ईबीएसडी, ईपीएमए और कॉन्फोकल रमन-इन-एसईएम इमेजिंग के योगदान द्वारा प्राकृतिक कैसिटेराइट में ट्रेस-एलिमेंट जोनेशन और क्रिस्टलोग्राफिक ओरिएंटेशन का एक मल्टीमॉडल माइक्रोकैरेक्टराइजेशन|journal=Journal of Microscopy|volume=270|issue=3|pages=309–317|doi=10.1111/jmi.12684|pmid=29336485|s2cid=33888400|issn=1365-2818}}</ref> इसके अलावा, कक्ष पर एक [[केंद्रित आयन बीम]] (एफआईबी) जोड़ने से सामग्री को हटाने की अनुमति मिलती है और इसलिए नमूने की 3डी इमेजिंग होती है। लो-वैक्यूम मोड जैविक और गैर-प्रवाहकीय नमूनों पर विश्लेषण की अनुमति देता है।
सहसंबंधी एसईएम-रमन इमेजिंग एक एसईएम कक्ष में एक कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोप का एकीकरण है जो एसई, बीएसई, [[ऊर्जा फैलाने वाला एक्स-रे स्पेक्ट्रोस्कोपी]], [[इलेक्ट्रॉन बैकस्कैटर विवर्तन]], [[इलेक्ट्रॉन बीम-प्रेरित वर्तमान]], [[कैथोडोल्यूमिनेसेंस]] जैसी कई विधियों की सहसंबंधी इमेजिंग की अनुमति देता है। , परमाणु बल माइक्रोस्कोपी।<ref>{{Cite journal|doi=10.1116/1.4897502|title = Integrating focused ion beam–scanning electron microscope with confocal Raman microscope into a single instrument|journal = Journal of Vacuum Science & Technology B, Nanotechnology and Microelectronics: Materials, Processing, Measurement, and Phenomena|volume = 32|issue = 6|pages = 06FC03|year = 2014|last1 = Jiruše|first1 = Jaroslav|last2 = Haničinec|first2 = Martin|last3 = Havelka|first3 = Miloslav|last4 = Hollricher|first4 = Olaf|last5 = Ibach|first5 = Wolfram|last6 = Spizig|first6 = Peter}}</ref> नमूना इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के निर्वात कक्ष में रखा गया है। दोनों विश्लेषण विधियों को फिर उसी नमूना स्थान पर स्वचालित रूप से निष्पादित किया जाता है। इसके बाद प्राप्त SEM और रमन छवियों को आरोपित किया जा सकता है।<ref>{{Cite journal|last1=Hollricher|first1=Olaf|last2=Schmidt|first2=Ute|last3=Breuninger|first3=Sonja|date=November 2014|title=RISE Microscopy: Correlative Raman-SEM Imaging|journal=Microscopy Today|volume=22|issue=6|pages=36–39|doi=10.1017/s1551929514001175|s2cid=138153106|issn=1551-9295}}</ref><ref>{{Cite journal|last1=Wille|first1=G.|last2=Lerouge|first2=C.|last3=Schmidt|first3=U.|date=2018-06-01|title=कैथोडोल्युमिनिसेंस, ईबीएसडी, ईपीएमए और कॉन्फोकल रमन-इन-एसईएम इमेजिंग के योगदान द्वारा प्राकृतिक कैसिटेराइट में ट्रेस-एलिमेंट जोनेशन और क्रिस्टलोग्राफिक ओरिएंटेशन का एक मल्टीमॉडल माइक्रोकैरेक्टराइजेशन|journal=Journal of Microscopy|volume=270|issue=3|pages=309–317|doi=10.1111/jmi.12684|pmid=29336485|s2cid=33888400|issn=1365-2818}}</ref> इसके अलावा, कक्ष पर एक [[केंद्रित आयन बीम]] (एफआईबी) जोड़ने से सामग्री को हटाने की अनुमति मिलती है और इसलिए नमूने की 3डी इमेजिंग होती है। लो-वैक्यूम मोड जैविक और गैर-प्रवाहकीय नमूनों पर विश्लेषण की अनुमति देता है।


== जैविक अनुप्रयोग ==
== जैविक अनुप्रयोग ==
रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग करके, नमूनों के सूक्ष्म क्षेत्रों के इन विवो समय और अंतरिक्ष-समाधान रमन स्पेक्ट्रा को मापा जा सकता है। नमूनाकरण गैर-विनाशकारी है और पानी, मीडिया और बफ़र्स आमतौर पर विश्लेषण में हस्तक्षेप नहीं करते हैं। नतीजतन, विवो समय में- और अंतरिक्ष-समाधान रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी [[प्रोटीन]], सेल (जीव विज्ञान) और [[अंग (शरीर रचना)]] की जांच करने के लिए उपयुक्त है। माइक्रोबायोलॉजी के क्षेत्र में, कन्फोकल रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग प्रोटीन, पॉलीसेकेराइड, और न्यूक्लिक एसिड और पॉलिमरिक समावेशन जैसे बैक्टीरिया और स्टेरोल्स में पॉली-β-हाइड्रॉक्सीब्यूट्रिक एसिड और पॉलीफॉस्फेट जैसे मैक्रोमोलेक्युलस के इंट्रासेल्युलर वितरण को मैप करने के लिए किया गया है। कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी के साथ स्थिर समस्थानिक जांच (एसआईपी) प्रयोगों के संयोजन ने की आत्मसात दरों के निर्धारण की अनुमति दी है <sup>13</sup>सी और <sup>15</sup>एन-सब्सट्रेट्स के साथ-साथ डी<sub>2</sub>ओ व्यक्तिगत जीवाणु कोशिकाओं द्वारा।<ref>Madigan, M.T., Bender, K.S., Buckley, D.H., Sattley, W.M. and Stahl, D.A. (2018) Brock Biology of Microorganisms, Pearson Publ., NY, NY, 1022 pp.</ref>
रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग करके, नमूनों के सूक्ष्म क्षेत्रों के इन विवो समय और अंतरिक्ष-समाधान रमन स्पेक्ट्रा को मापा जा सकता है। नमूनाकरण गैर-विनाशकारी है और पानी, मीडिया और बफ़र्स आमतौर पर विश्लेषण में हस्तक्षेप नहीं करते हैं। परिणाम स्वरुप , विवो समय में- और अंतरिक्ष-समाधान रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी [[प्रोटीन]], सेल (जीव विज्ञान) और [[अंग (शरीर रचना)]] की जांच करने के लिए उपयुक्त है। माइक्रोबायोलॉजी के क्षेत्र में, कन्फोकल रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग प्रोटीन, पॉलीसेकेराइड, और न्यूक्लिक अम्ल  और पॉलिमरिक समावेशन जैसे बैक्टीरिया और स्टेरोल्स में पॉली-β-हाइड्रॉक्सीब्यूट्रिक अम्ल  और पॉलीफॉस्फेट जैसे मैक्रोमोलेक्युलस के इंट्रासेल्युलर वितरण को मैप करने के लिए किया गया है। कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी के साथ स्थिर समस्थानिक जांच (एसआईपी) प्रयोगों के संयोजन ने की आत्मसात दरों के निर्धारण की अनुमति दी है <sup>13</sup>सी और <sup>15</sup>एन-सब्सट्रेट्स के साथ-साथ डी<sub>2</sub>ओ व्यक्तिगत जीवाणु कोशिकाओं द्वारा।<ref>Madigan, M.T., Bender, K.S., Buckley, D.H., Sattley, W.M. and Stahl, D.A. (2018) Brock Biology of Microorganisms, Pearson Publ., NY, NY, 1022 pp.</ref>
== यह भी देखें ==
== यह भी देखें ==
* [[रमन बिखरना]]
* [[रमन बिखरना]]

Revision as of 11:27, 7 June 2023

Photo of a confocal Raman imaging microscope
कन्फोकल रमन इमेजिंग माइक्रोस्कोप
Photo of a Raman microscope, with a sample enclosure
रमन माइक्रोस्कोप

रमन माइक्रोस्कोप एक लेजर आधारित माइक्रोस्कोप उपकरण है जिसका उपयोग रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी करने के लिए किया जाता है।[1] मोल (आणविक प्रकाशिकी लेजर परीक्षक) शब्द का उपयोग रमन-आधारित माइक्रोप्रोब को संदर्भित करने के लिए किया जाता है।[1] उपयोग की जाने वाली विधि का नाम सी. वी. रमन के नाम पर रखा गया है जिन्होंने तरल पदार्थों में प्रकीर्णन वाले गुणों की खोज की थी।[2]

कॉन्फ़िगरेशन

रमन माइक्रोस्कोप एक मानक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप से प्रारंभ होता है और एक उत्साहित लेज़र ऑप्टिकल फिल्टर या लॉन्गपास, एक स्पेक्ट्रोमीटर या मोनोक्रोमेटर, और एक ऑप्टिकल संवेदनशील संसूचक जैसे चार्ज-युग्मित उपकरण (सीसीडी), या फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब, (पीएमटी) जोड़ता है। परंपरागत रूप से रमन माइक्रोस्कोपी का उपयोग नमूने पर एक बिंदु के रमन स्पेक्ट्रम को मापने के लिए किया जाता था वर्तमान ही में इस विधि को त्रि-आयामी अंतरिक्ष नमूने पर देखने के पूरे क्षेत्र में प्रत्यक्ष रासायनिक इमेजिंग के लिए रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी को प्रयुक्त करने के लिए विस्तारित किया गया है।

इमेजिंग मोड

प्रत्यक्ष इमेजिंग में देखने के पूरे क्षेत्र की तरंगों की एक छोटी श्रृंखला (रमन शिफ्ट) पर प्रकीर्णन के लिए जांच की जाती है। उदाहरण के लिए कोलेस्ट्रॉल के लिए एक तरंग संख्या विशेषता का उपयोग सेल संस्कृति के अंदर कोलेस्ट्रॉल के वितरण को रिकॉर्ड करने के लिए किया जा सकता है।

अन्य दृष्टिकोण हाइपरस्पेक्ट्रल इमेजिंग या रासायनिक इमेजिंग है जिसमें पूरे दृश्य क्षेत्र से हजारों रमन स्पेक्ट्रा प्राप्त किए जाते हैं। तब डेटा का उपयोग विभिन्न घटकों के स्थान और मात्रा को दर्शाने वाली छवियां उत्पन्न करने के लिए किया जा सकता है। सेल संस्कृति का उदाहरण लेते हुए, एक हाइपरस्पेक्ट्रल छवि कोलेस्ट्रॉल के वितरण को दिखा सकती है,[3] साथ ही प्रोटीन, न्यूक्लिक अम्ल और फैटी अम्ल ।[4][5][6] परिष्कृत सिग्नल- और इमेज-प्रोसेसिंग विधियों का उपयोग पानी संस्कृति मीडिया, बफ़र्स और अन्य हस्तक्षेप की उपस्थिति को अनदेखा करने के लिए किया जा सकता है।

संकल्प

रमन माइक्रोस्कोपी, और विशेष रूप से संनाभि माइक्रोस्कोपी , उप-माइक्रोमीटर पार्श्व स्थानिक संकल्प तक पहुंच सकते हैं।[7] क्योंकि रमन सूक्ष्मदर्शी एक विवर्तन-सीमित प्रणाली है, इसका स्थानिक विभेदन प्रकाश की तरंग दैर्ध्य और ध्यान केंद्रित करने वाले तत्व के संख्यात्मक छिद्र पर निर्भर करता है। कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोपी में, कॉन्फोकल अपर्चर का व्यास एक अतिरिक्त कारक है। वलय के एक नियम के रूप में, पार्श्व स्थानिक संकल्प वायु उद्देश्य लेंस का उपयोग करते समय लगभग लेजर तरंगदैर्ध्य तक पहुंच सकता है, जबकि तेल या पानी के विसर्जन के उद्देश्य लगभग आधे लेजर तरंग दैर्ध्य के पार्श्व संकल्प प्रदान कर सकते हैं। इसका अर्थ यह है कि जब दृश्यमान से निकट-अवरक्त सीमा में संचालित किया जाता है तो रमन माइक्रोस्कोप लगभग पार्श्व संकल्प प्राप्त कर सकता है। 1 माइक्रोमीटर से 250 एनएम तक, जबकि गहराई रिज़ॉल्यूशन (यदि नमूना की ऑप्टिकल पैठ गहराई तक सीमित नहीं है) 1-6 माइक्रोमीटर से लेकर सबसे छोटे कॉन्फोकल पिनहोल एपर्चर के साथ दस माइक्रोमीटर तक हो सकता है जब बिना कॉन्फोकल पिनहोल के संचालित किया जाता है।[8][9][10] चूंकि माइक्रोस्कोप के ऑब्जेक्टिव लेंस लेजर बीम को माइक्रोमीटर सीमा तक फोकस करते हैं, परिणामी फोटॉन फ्लक्स पारंपरिक रमन सेटअपों की तुलना में बहुत अधिक है। इसमें हस्तक्षेप करने वाले प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने वाले अणुओं की बढ़ी हुई फोटोब्लीचिंग का अतिरिक्त प्रभाव है। चूँकि उच्च फोटॉन प्रवाह भी नमूना गिरावट का कारण बन सकता है और इस प्रकार, प्रत्येक प्रकार के नमूने के लिए लेजर तरंग दैर्ध्य और लेजर शक्ति को सावधानी से चुनना होगा।

रमन इमेजिंग

Chemical Imaging of a pharmaceutical emulsion with confocal Raman microscopy


एक अन्य उपकरण जो अधिक लोकप्रिय हो रहा है वह है वैश्विक रमन इमेजिंग इस विधि का उपयोग बड़े मापदंड के उपकरणों के लक्षण वर्णन विभिन्न यौगिकों के मानचित्रण और गतिकी अध्ययन के लिए किया जा रहा है। यह पहले से ही ग्राफीन परतों के लक्षण वर्णन के लिए उपयोग किया जा चुका है[11] जे-समुच्चय कार्बन नैनोट्यूब के अंदर जे-एग्रीगेटेड डाई और कई अन्य 2डी सामग्री जैसे मोलिब्डेनम डाइसल्फ़ाइड| MoS2[12] और टंगस्टन डिसेलेनाइड WSe2 चूँकि उत्तेजना पुँज पूरे क्षेत्र में फैला हुआ है इसलिए उन मापों को नमूने को हानि पहुँचाए बिना किया जा सकता है।

रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग करके नमूनों के सूक्ष्म क्षेत्रों के इन विवो समय और अंतरिक्ष-समाधान रमन स्पेक्ट्रा को मापा जा सकता है। परिणाम स्वरुप पानी, मीडिया और बफ़र्स की प्रतिदीप्ति को हटाया जा सकता है। परिणाम स्वरुप यह प्रोटीन, कोशिकाओं और ऑर्गेनेल की जांच करने के लिए उपयुक्त है।

जैविक और चिकित्सकीय नमूनों के लिए रमन माइक्रोस्कोपी सामान्यतः नियर-इन्फ्रारेड (एनआईआर) लेज़रों (785 एनएम डायोड-पंप सॉलिड-स्टेट लेजर और 1064 एनएम एनडी:याग लेज़र|एनडी:याग विशेष रूप से समान हैं) का उपयोग करता है। यह उच्च ऊर्जा तरंग दैर्ध्य को प्रयुक्त करके नमूने को हानि पहुंचाने के कठिन परिस्थितिको कम करता है। चूँकि एनआईआर रमन प्रकीर्णन की तीव्रता कम है (ω4 रमन प्रकीर्णन तीव्रता की निर्भरता) और अधिकांश सूचकों को बहुत लंबे संग्रह समय की आवश्यकता होती है। वर्तमान ही में अधिक संवेदनशील संसूचक उपलब्ध हो गए हैं जिससे विधि उत्तम अनुकूल हो गई है

सामान्य उपयोग के लिए अकार्बनिक नमूनों की रमन माइक्रोस्कोपी जैसे कि चट्टानें चीनी मिट्टी की चीज़ें और पॉलिमर, <रेफरी नाम = श्मिट 133-143>Schmidt, U.; Hild, S.; Ibach, W.; Hollricher, O. (2005-12-01). "कन्फोकल रमन एएफएम के साथ नैनोमीटर स्केल पर थिन पॉलीमर फिल्म्स की विशेषता". Macromolecular Symposia. 230 (1): 133–143. doi:10.1002/masy.200551152. ISSN 1521-3900.</ref> उत्तेजन तरंगदैर्घ्य की व्यापक श्रेणी का उपयोग कर सकता है।

एक संबंधित विधि टिप-एन्हांस्ड रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी, एकल अणुओं और डीएनए की उच्च-रिज़ॉल्यूशन हाइपरस्पेक्ट्रल छवियों का उत्पादन कर सकती है।

एक संबंधित तकनीक, टिप-एन्हांस्ड रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी, एकल अणुओं की उच्च-रिज़ॉल्यूशन हाइपरस्पेक्ट्रल छवियां उत्पन्न कर सकती है रेफरी>Apkarian, V. Ara; Nicholas Tallarida; Crampton, Kevin T.; Lee, Joonhee (April 2019). "परमाणु रूप से सीमित प्रकाश के साथ एकल अणु के कंपन सामान्य मोड की कल्पना करना". Nature. 568 (7750): 78–82. Bibcode:2019Natur.568...78L. doi:10.1038/s41586-019-1059-9. ISSN 1476-4687. PMID 30944493. S2CID 92998248.</ref> और डीएनए। रेफरी>He, Zhe; Han, Zehua; Kizer, Megan; Linhardt, Robert J.; Wang, Xing; Sinyukov, Alexander M.; Wang, Jizhou; Deckert, Volker; Sokolov, Alexei V. (2019-01-16). "टिप-एन्हांस्ड रमन इमेजिंग ऑफ़ सिंगल-स्ट्रेंडेड डीएनए विद सिंगल बेस रेजोल्यूशन". Journal of the American Chemical Society. 141 (2): 753–757. doi:10.1021/jacs.8b11506. ISSN 0002-7863. PMID 30586988. S2CID 58552541.</ref>

सहसंबंधी रमन इमेजिंग

Correlative Raman-हेमटिट की एसईएम इमेजिंग। थंब। हेमेटाइट की सहसंबद्ध रमन-एसईएम इमेजिंग (आरआईएसई माइक्रोस्कोप, डब्ल्यूआईटीईसी के साथ ली गई)। रमन छवि SEM छवि पर आच्छादित है।


कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोपी को कई अन्य माइक्रोस्कोपी विधियों के साथ जोड़ा जा सकता है। विभिन्न तरीकों का उपयोग करके और डेटा को सहसंबद्ध करके, उपयोगकर्ता नमूने की अधिक व्यापक समझ प्राप्त करता है। सहसंबंधी माइक्रोस्कोपी विधियों के सामान्य उदाहरण हैं परमाणु बल माइक्रोस्कोपी | रमन-एएफएम,[13]<रेफरी नाम = श्मिट 133-143 /> रमन- निकट-क्षेत्र स्कैनिंग ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप ,[14] और रमन-स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप।[15] सहसंबंधी एसईएम-रमन इमेजिंग एक एसईएम कक्ष में एक कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्कोप का एकीकरण है जो एसई, बीएसई, ऊर्जा फैलाने वाला एक्स-रे स्पेक्ट्रोस्कोपी, इलेक्ट्रॉन बैकस्कैटर विवर्तन, इलेक्ट्रॉन बीम-प्रेरित वर्तमान, कैथोडोल्यूमिनेसेंस जैसी कई विधियों की सहसंबंधी इमेजिंग की अनुमति देता है। , परमाणु बल माइक्रोस्कोपी।[16] नमूना इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के निर्वात कक्ष में रखा गया है। दोनों विश्लेषण विधियों को फिर उसी नमूना स्थान पर स्वचालित रूप से निष्पादित किया जाता है। इसके बाद प्राप्त SEM और रमन छवियों को आरोपित किया जा सकता है।[17][18] इसके अलावा, कक्ष पर एक केंद्रित आयन बीम (एफआईबी) जोड़ने से सामग्री को हटाने की अनुमति मिलती है और इसलिए नमूने की 3डी इमेजिंग होती है। लो-वैक्यूम मोड जैविक और गैर-प्रवाहकीय नमूनों पर विश्लेषण की अनुमति देता है।

जैविक अनुप्रयोग

रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग करके, नमूनों के सूक्ष्म क्षेत्रों के इन विवो समय और अंतरिक्ष-समाधान रमन स्पेक्ट्रा को मापा जा सकता है। नमूनाकरण गैर-विनाशकारी है और पानी, मीडिया और बफ़र्स आमतौर पर विश्लेषण में हस्तक्षेप नहीं करते हैं। परिणाम स्वरुप , विवो समय में- और अंतरिक्ष-समाधान रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी प्रोटीन, सेल (जीव विज्ञान) और अंग (शरीर रचना) की जांच करने के लिए उपयुक्त है। माइक्रोबायोलॉजी के क्षेत्र में, कन्फोकल रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग प्रोटीन, पॉलीसेकेराइड, और न्यूक्लिक अम्ल और पॉलिमरिक समावेशन जैसे बैक्टीरिया और स्टेरोल्स में पॉली-β-हाइड्रॉक्सीब्यूट्रिक अम्ल और पॉलीफॉस्फेट जैसे मैक्रोमोलेक्युलस के इंट्रासेल्युलर वितरण को मैप करने के लिए किया गया है। कॉन्फोकल रमन माइक्रोस्पेक्ट्रोस्कोपी के साथ स्थिर समस्थानिक जांच (एसआईपी) प्रयोगों के संयोजन ने की आत्मसात दरों के निर्धारण की अनुमति दी है 13सी और 15एन-सब्सट्रेट्स के साथ-साथ डी2ओ व्यक्तिगत जीवाणु कोशिकाओं द्वारा।[19]

यह भी देखें

संदर्भ

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