प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी
इम्यून इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (जिसे अक्सर इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी कहा जाता है) इम्यूनोफ्लोरेसेंस के बराबर है, लेकिन यह हल्की माइक्रोस्कोपी के बजाय इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करता है।[1] इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी ब्याज के एक अणु की पहचान और स्थानीयकरण करता है, विशेष रूप से ब्याज की प्रोटीन, इसे एक विशेष एंटीबॉडी से जोड़कर। यह बंधन सेल को स्लाइड में एम्बेडिंग करने से पहले या बाद में बन सकता है। एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच एक प्रतिक्रिया होती है, जिससे यह लेबल माइक्रोस्कोप के नीचे दिखाई देता है। यदि एंटीजन कोशिका की सतह पर है तो स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी एक व्यवहार्य विकल्प है, लेकिन यदि एंटीजन सेल के भीतर है तो लेबल को देखने के लिए ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी की आवश्यकता हो सकती है।[2]
प्रक्रिया
एंटीजन और उनके संबंधित एंटीबॉडी (आमतौर पर दो) अनुभाग में बातचीत करते हैं।[1]ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी तब एंटीबॉडी का पता लगाता है और इसलिए, प्रोटीन। दूसरा एंटीबॉडी आमतौर पर सोने के लिए बाध्य होता है क्योंकि सोने की परमाणु संख्या अधिक होती है, जिससे यह बहुत घना हो जाता है। कोलाइडल सोने के कण उनके साथ जैव संयुग्मन द्वारा एंटीबॉडी को दृश्यमान बनाते हैं, क्योंकि उनका सटीक व्यास ज्ञात होता है।[3] इलेक्ट्रॉन जब माइक्रोस्कोप से गुजरते हैं तो सोने के इस कण से टकराते हैं। घने सोने का परमाणु इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप से उत्सर्जित होने वाले इलेक्ट्रॉनों को दर्शाता है और नमूने के भीतर लक्ष्य कण की उपस्थिति का कारण बनता है।[1]
एक अन्य संभावित प्रक्रिया में प्रोटीन ए शामिल होता है, जो एक जीवाणु से प्राप्त होता है। यह सोने के परमाणु को स्थायी रूप से कोट करता है और एंटीबॉडी के निरंतर क्षेत्र से जुड़ा रहता है। यह प्रक्रिया प्रोटीन ए को माध्यमिक के प्रतिस्थापन के रूप में उपयोग करती है और इसके परिणामस्वरूप, केवल एक एंटीबॉडी की आवश्यकता होती है। प्रोटीन ए लक्ष्य प्रोटीन को दृश्यमान बनाता है। इस प्रकार, पूरी प्रक्रिया का परिणाम लक्ष्य प्रोटीन के स्थानीयकरण और दृश्यता में होता है।[1]
प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करते समय, नमूना या तो पतले वर्गों में हो सकता है ताकि इलेक्ट्रॉन उसमें प्रवेश कर सकें या नकारात्मक रूप से दागदार हो सकें। नकारात्मक धुंधला होने का उच्च रिज़ॉल्यूशन होता है लेकिन केवल उन अणुओं की पहचान कर सकता है जो अकेले खड़े होने पर पहचानने योग्य होंगे। जब प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी में उपयोग किया जाता है, तो नकारात्मक धुंधला नमूना में एक छोटे कण को प्रत्यारोपित करता है, इसके भीतर बेहतर समाधान संरचनाएं होती हैं। इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का लाभ यह है कि यह कणों की पहचान के लिए अनुमति देता है, चाहे कोई भी संदर्भ हो।[4]
जटिलताओं और परिणाम
संभावित जटिलताएं
इलेक्ट्रॉनों को पारित करने की अनुमति देने के लिए सूक्ष्मदर्शी के नीचे के खंड बहुत पतले होने चाहिए। रासायनिक निर्धारण (हिस्टोलॉजी) और एम्बेडिंग (आमतौर पर प्लास्टिक में) सहित पतले वर्गों को बनाने के लिए आवश्यक कदमों की तैयारी के दौरान कुछ जटिलताएँ उत्पन्न हो सकती हैं। ये कठोर तैयारी एंटीजन को निरूपित कर सकती हैं, एंटीबॉडी के साथ उनके आवश्यक बंधन को बाधित कर सकती हैं। शोधकर्ताओं ने इन मुद्दों को दरकिनार करने और एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच बातचीत को संरक्षित करने के लिए विशिष्ट प्रक्रियाओं का आविष्कार और उपयोग किया है। इन विधियों में रासायनिक निर्धारण के बजाय प्रकाश निर्धारण शामिल है, नमूना को खंडित करने से पहले जमा देना, और इसे उच्च तापमान के बजाय कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करना।[1]
एंटीबॉडी और उनके संबंधित एंटीजन के बीच या एंटीबॉडी और उनके सोने के लेबल के बीच बंधन केवल कम सांद्रता या बंधन पर स्टेरिक बाधा के प्रभाव के कारण आंशिक रूप से सुरक्षित हो सकते हैं। वायरस के बिना स्वाभाविक रूप से होने वाली लेबलिंग की मात्रा के लिए नियंत्रण समूह आवश्यक हैं।[5]
परिणाम
प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के परिणाम आम तौर पर दृष्टिगत रूप से निर्धारित किए जाते हैं। मात्रात्मक अनुसंधान के प्रभावी होने के लिए नमूने में कुछ विशेषताएं होनी चाहिए, इसके उपयोग की आवृत्ति को सीमित करना। यह देखने जैसी स्थितियों में लागू होता है कि किसी विशेष एंटीबॉडी से कितने कोलाइडल सोने के कण जुड़े हुए हैं।[5]सफल प्रयोगों के दौरान, प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी प्रोटीन का सटीक पता लगा सकती है और संरचना और कार्य के बीच संबंधों की समझ को मजबूत कर सकती है। लेबलिंग और स्थानीयकरण में ये प्रक्रियाएँ शोधकर्ताओं को विभिन्न सेलुलर मार्गों और प्रक्रियाओं को समझने में मदद करती हैं।[3]
इतिहास
1931 में, अर्नेस्ट रसा (1986 नोबेल पुरस्कार विजेता) और मैक्स नॉल ने पहला इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप बनाया। इस आविष्कार ने स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप और ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का नेतृत्व किया, जिसने बाद में इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी में योगदान दिया। पहले, प्रौद्योगिकी केवल द्वि-आयामी छवियों के लिए अनुमति देती थी, लेकिन अब आधुनिक तकनीक के साथ, त्रि-आयामी छवियां भी उपलब्ध हैं।[3]
इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के बारे में तब आया जब 1940 के दशक में दो स्वतंत्र समूहों ने तम्बाकू मोज़ेक वायरस और इसके एंटीसेरम को मिलाया। फिर उन्होंने एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के तहत इसकी जांच की। इस समय, दिन के अतिरिक्त कंट्रास्ट और खराब गुणवत्ता वाले सूक्ष्मदर्शी की कमी के कारण ऑप्टिकल संकल्प बहुत खराब था। प्रयोग में उपयोग किए गए कणों को रॉड के आकार के रूप में जाना जाता था, और शोधकर्ताओं के दोनों समूहों ने इन छड़ों को अपने मूल आकार से लगभग दोगुने समूह में एक साथ टकराते हुए पाया। डेढ़ दशक से भी अधिक समय के बाद, शोधकर्ताओं ने वायरस से जुड़े एकवचन एंटीबॉडी का उपयोग करना शुरू किया। अंत में, 1962 में, नकारात्मक रूप से सना हुआ एंटीबॉडी निकला।[4]
अनुप्रयोग
वाइरस
ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी सफलतापूर्वक संरचना के बारे में सामान्य जानकारी प्रदान करता है लेकिन वायरस या सेल के अधिक विस्तृत भागों को अलग करने के लिए संघर्ष करता है। इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी वायरल संक्रमणों का निदान करने और टीकों में वायरल एंटीजन का पता लगाने में सहायता करती है।[5]इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी पर्याप्त रूप से रोगों का निदान कर सकती है और रोगजनकों की पहचान कर सकती है। एक उदाहरण तहखाना झिल्ली पर मेलिन के विनाश को दर्शाने की इसकी क्षमता है। यह क्षति धीमी तंत्रिका आवेगों से जुड़ी हो सकती है, जिसके परिणामस्वरूप संज्ञानात्मक और शारीरिक मुद्दों की एक विस्तृत श्रृंखला होती है। एक अन्य उदाहरण में त्वचीय घावों की पहचान शामिल है। इस मामले में, वैज्ञानिकों ने तहखाने की झिल्ली में अपर्याप्त एंकरिंग तंतुओं की खोज की, जिससे त्वचा अधिक नाजुक हो गई। दोनों उदाहरणों में, वैज्ञानिकों ने इन बीमारियों के बारे में अधिक जानने और जानने के लिए प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करने के लिए लक्षित करने के लिए एक विशिष्ट प्रतिजन की पहचान की।[6]
गुर्दे की बायोप्सी
प्रारंभ में, गुर्दे की बायोप्सी में इम्यूनोफ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग किया जाता था, जो इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी की तुलना में कम रिज़ॉल्यूशन प्रदान करता था। प्रकाश माइक्रोस्कोपी से इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी पर स्विच करने से पहले, परिणामों ने दिखाया कि अधिक सटीक निदान सुनिश्चित करने के लिए अतिरिक्त इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए कॉल करने वाली कई बायोप्सी हैं। इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का अतिरिक्त उपयोग प्रारंभिक निदान करने और प्रकाश माइक्रोस्कोपी के निष्कर्षों की पुष्टि करने के लिए हुआ। वैज्ञानिकों ने प्रत्येक प्रकार की माइक्रोस्कोपी की प्रभावशीलता पर एक शोध अध्ययन पूरा करने का निर्णय लिया। कई मामलों में केवल प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग करते हुए, चिकित्सक प्रारंभिक निदान नहीं कर सके। कुछ का गलत निदान भी था। प्रयोग में निदान के प्रकार ने भी महत्वपूर्ण भूमिका निभाई। प्रतिदीप्ति प्रकाश माइक्रोस्कोपी ने कुछ निदानों की सटीक पहचान की, जिनका पालन करने की कोई आवश्यकता नहीं है। दूसरों को अंतर करना और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी की आवश्यकता के लिए और अधिक कठिन था। यहां तक कि उन रोगियों में भी जहां इम्यूनोफ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी ने सही परिणाम दिए, शोधकर्ताओं ने अभी भी माना कि पुष्टि की आवश्यकता थी। इस अध्ययन के परिणामों ने गुर्दे की बायोप्सी निदान के लिए प्रकाश माइक्रोस्कोपी से इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी पर स्विच करने की आवश्यकता का प्रदर्शन किया।[7]
संदर्भ
- ↑ 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 Lodish, Harvey; Berk, Arnold; Kaiser, Chris; Krieger, Monty; Bretscher, Anthony; Ploegh, Hidde; Amon, Angelika; Martin, Kelsey (April 1, 2016). आणविक कोशिका जीव विज्ञान (8 ed.). W.H. Freeman. ISBN 978-1464183393.
- ↑ "कोर इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी सुविधा - यूएमएएसएस मेडिकल स्कूल में इम्यूनो-इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी सेवाएं". UMass Chan Medical School (in English). 2 November 2013. Retrieved 5 December 2022.
- ↑ 3.0 3.1 3.2 "इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी". The Human Protein Atlas.
- ↑ 4.0 4.1 Milne, Robert G. (1991). पादप रोगजनकों की इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी. Springer, Berlin, Heidelberg. pp. 87–102. doi:10.1007/978-3-642-75818-8_7. ISBN 978-3-642-75818-8. S2CID 80868758. Retrieved 6 December 2022.
- ↑ Cardones, Adela Rambi G.; Hall, Russell P. (1 January 2019). "63 - Bullous Diseases of the Skin and Mucous Membranes". क्लिनिकल इम्यूनोलॉजी (in English) (5 ed.). Elsevier. pp. 857–870.e1. ISBN 978-0-7020-6896-6. Retrieved 6 December 2022.
- ↑ Haas, M. (1 January 1997). "देशी गुर्दे की बायोप्सी की परीक्षा में नियमित इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का पुनर्मूल्यांकन।". Journal of the American Society of Nephrology (in English). 8 (1): 70–76. doi:10.1681/ASN.V8170. ISSN 1046-6673. PMID 9013450. S2CID 26970189. Retrieved 6 December 2022.
