ऋणात्मक अभिरंजन

माइक्रोस्कोपी में, नेगेटिव धुंधला हो जाना एक स्थापित विधि है, जिसका उपयोग अक्सर डायग्नोस्टिक माइक्रोस्कोपी में किया जाता है, एक पतले जैविक नमूने को प्रकाशिकी अपारदर्शिता (ऑप्टिक्स) द्रव के साथ तुलना करने के लिए। इस तकनीक में, पृष्ठभूमि धुंधला हो जाती है, जिससे वास्तविक नमूना अछूता रह जाता है, और इस प्रकार दिखाई देता है। यह सकारात्मक धुंधलापन के विपरीत है, जिसमें वास्तविक नमूना दागदार है।

उज्ज्वल क्षेत्र माइक्रोस्कोपी

Main article: Bright-field microscopy

उज्ज्वल-क्षेत्र माइक्रोस्कोपी के लिए, नकारात्मक धुंधलापन आमतौर पर एक काली स्याही तरल पदार्थ जैसे निग्रोसिन और भारत स्याही का उपयोग करके किया जाता है। नमूना, जैसे एक कांच की स्लाइड पर फैला हुआ गीला जीवाणु कल्चर, नकारात्मक दाग के साथ मिलाया जाता है और सूखने दिया जाता है। जब सूक्ष्मदर्शी से देखा जाता है तो जीवाणु कोशिकाएं, और शायद उनके बीजाणु, अंधेरे के आसपास की पृष्ठभूमि के खिलाफ प्रकाश दिखाई देते हैं। नकारात्मक दाग देने के लिए एक साधारण वाटरप्रूफ मार्किंग पेन का उपयोग करके एक वैकल्पिक विधि विकसित की गई है।

ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी

Main article: Transmission electron microscopy

[[ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी]] के मामले में, इलेक्ट्रॉनों की अपारदर्शिता परमाणु संख्या, यानी प्रोटॉन की संख्या से संबंधित है। कुछ उपयुक्त नकारात्मक दागों में अमोनियम मोलिब्डेट, यूरेनिल एसीटेट, यूरेनिल फॉर्मेट, फॉस्फोटुंगस्टिक एसिड, आज़मियम टेट्रोक्साइड, ऑस्मियम फेरिकैनाइड शामिल हैं। और auroglucothionate। इन्हें इसलिए चुना गया है क्योंकि ये इलेक्ट्रॉनों को मजबूती से बिखेरते हैं और जैविक पदार्थों को भी अच्छी तरह से अवशोषित करते हैं। जो संरचनाएं नकारात्मक रूप से अभिरंजित हो सकती हैं, वे प्रकाश सूक्ष्मदर्शी से अध्ययन किए गए संरचनाओं की तुलना में बहुत छोटी हैं। यहां, विधि का उपयोग वाइरस , बैक्टीरिया, बैक्टीरियल कशाभिका, जैविक झिल्ली संरचनाओं और प्रोटीन या प्रोटीन समुच्चय को देखने के लिए किया जाता है, जिनमें सभी की इलेक्ट्रॉन-प्रकीर्णन शक्ति कम होती है। कुछ दाग, जैसे ऑस्मियम टेट्रोक्साइड और ऑस्मियम फेरिकैनाइड, रासायनिक रूप से बहुत सक्रिय होते हैं। मजबूत ऑक्सीडेंट के रूप में, वे मुख्य रूप से असंतृप्त कार्बन-कार्बन बॉन्ड के साथ प्रतिक्रिया करके लिपिड को क्रॉस-लिंक करते हैं, और इस तरह दोनों ऊतक के नमूनों में जैविक झिल्ली को ठीक करते हैं और साथ ही उन्हें दाग देते हैं। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी में नकारात्मक दाग का चुनाव बहुत महत्वपूर्ण हो सकता है। एक रोगग्रस्त पौधे से नकारात्मक रूप से दाग वाले पत्तों के डिप्स का उपयोग करने वाले पादप विषाणुओं के एक प्रारंभिक अध्ययन में एक दाग के साथ केवल गोलाकार विषाणु और दूसरे के साथ केवल छड़ के आकार के विषाणु दिखाई दिए। सत्यापित निष्कर्ष यह था कि यह पौधा दो अलग-अलग विषाणुओं के मिश्रित संक्रमण से पीड़ित था। जब तक कड़ी सुरक्षा सावधानियों का पालन नहीं किया जाता है, तब तक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी और इलेक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शी दोनों स्तरों पर नकारात्मक धुंधलापन कभी भी संक्रमण वाले जीवों के साथ नहीं किया जाना चाहिए। नकारात्मक धुंधला आमतौर पर एक बहुत ही हल्की तैयारी विधि है और इस प्रकार ऑपरेटर संक्रमण की संभावना को कम नहीं करता है।

अन्य अनुप्रयोग

नेगेटिव स्टेनिंग द्वारा परतदार (ले), रिवर्स-माइकेलर (एम) और रिवर्स-हेक्सागोनल एच-II सिलिंडर (एच) लिपिड चरणों की पहचान।

नेगेटिव स्टेनिंग ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी को लैमेलर लाइपोसोम ्स (ली), उल्टे गोलाकार मिसेलस (एम) और उल्टे हेक्सागोनल एचआईआई बेलनाकार (एच) चरणों (चित्र देखें) जैसे जलीय लिपिड समुच्चय के अध्ययन और पहचान के लिए सफलतापूर्वक नियोजित किया गया है।

बाहरी संबंध

• "Negative staining for dummies". Retrieved 2009-06-06.
• "Negative staining". Archived from the original on 2012-12-25. Retrieved 2009-06-06.